In June 1996 in the state of Oaxaca, Mexico, larvae of the mosquito species Aedes aegypti were exposed to infective preparasites of the nematode Romanomermis culicivorax, Ross and Smith, in the laboratory and in the field. For the laboratory experiments larvae in instars I-IV were used; they had been collected in natural reservoirs. The laboratory experiments were carried out in triplicate, with 100 larvae of each larval stage per experiment. Three preparasite application dosage ratios were tested: 5, 10, or 15 preparasites per mosquito larva. For the field studies 13 A. aegypti outdoor breeding sites were used, with larvae in instars I-IV and a 15:1 preparasite dosage ratio. With the laboratory experiments, an increase was observed in the average infestation of the larvae as the preparasite application ratio was increased from 5:1 to 15:1. With a 10:1 ratio, the rates of parasitism were 100%, 100%, 85%, and 74% in the larvae in instars I, II, III, and IV, respectively; for the 15:1 preparasite ratio, parasitism rates were 100%, 100%, 90%, and 79%, respectively. The field tests with the 15:1 preparasite dosage ratio in the 13 outdoor reservoirs produced parasitism rates of 80% to 98%, thus demonstrating the susceptibility of this species of mosquito to parasitism by R. culicivorax in Oaxaca, Mexico.

En junio de 1996, en el Estado de Oaxaca, México, se expusieron larvas de mosquito de la especie Aedes aegypti (Linneo) a los preparásitos infectivos del nemátodo Romanomermis culicivorax, Ross y Smith, en condiciones de laboratorio y de campo. Para los experimentos de laboratorio se utilizaron larvas en estadio I-IV, colectadas en reservorios naturales. Los experimentos se realizaron por triplicado, con 100 larvas de cada estadio larvario por experimento, y se probaron tres dosis de aplicación: 5:1, 10:1 y 15:1 (5, 10 ó 15 preparásitos por larva de mosquito). Para los estudios de campo se tomaron 13 criaderos naturales de A. aegypti con larvas en estadio I-IV y se aplicó una dosis de 15:1 por cada criadero. De acuerdo con los resultados obtenidos en los experimentos de laboratorio, se observó un aumento de la infestación media de las larvas a medida que aumentaba la dosis de aplicación desde 5:1 hasta 15:1. Para la dosis de 10:1, la tasa de parasitismo alcanzó valores de 100, 100, 85 y 74% en las larvas en estadio I, II, III y IV, respectivamente, y, para la dosis de 15:1, valores de 100, 100, 90 y 79%, respectivamente. Los resultados de las pruebas de campo con la aplicación de una dosis de 15:1 en los 13 reservorios naturales proporcionaron elevadas tasas de parasitismo, con valores entre 80-98%, lo que demostró la susceptibilidad de esta especie de mosquito al parasitismo por R. culicivorax en el Estado de Oaxaca, México.

In order to begin mass producing the nematode Romanomermis iyengari Welch, a bioprocessing plant was designed and set up on the grounds of Universidad Federal in the State of Roraima, Brazil, after reaching an agreement with that State's Health Department. The objective of this paper was to establish the basic process for mass breeding the parasite in order to apply it to anopheline breeding sites. Cultures were obtained at a rate of 68 during every seven-day cycle, making for a total of 272 cultures a month. Before treatments were applied in the field, laboratory tests were conducted that showed the great susceptibility of anopheline larvae to infestation by R. iyengari, with parasitism rates ranging from 71 to 98%. In order to assess the parasitizing capacity of R. iyengari in actual field conditions, 12 natural anopheline breeding sites were chosen, each ranging in size between 50 and 450 m². The species Anopheles albitarsis Lynch-Arribálzaga and Anopheles rondoni Neiva-Pinto were detected there, at densities that ranged from 34 to 66 larvae/m². The biolarvicide was sprayed in all 12 breeding sites with a domestically manufactured pump set at a pressure of two atmospheres and a dose of 2000 preparasites/m². Seven days after treatments were performed, anopheline populations were markedly reduced (85 to 97%). Results obtained point to the feasibility of using R. iyengari to control larval populations of both species of anophelines.

Para desarrollar la producción masiva del nemátodo Romanomermis iyengari Welch, se llevó a cabo el diseño y montaje de una bioplanta en las instalaciones de la Universidad Federal del Estado de Roraima, Brasil, tras un convenio con la Secretaría de Salud del mencionado estado. El objetivo de este trabajo fue establecer el proceso básico de cría masiva del parásito para su posterior aplicación en criaderos de anofelinos. Se obtuvieron 68 cultivos por cada ciclo de siete días, con un total de 272 cultivos por mes. Antes de los tratamientos de campo se realizaron pruebas de laboratorio en las que se comprobó la gran susceptibilidad de las larvas de anofelinos a la infestación por R. iyengari, con tasas de parasitismo de 71 a 98%. Para evaluar la capacidad parasitaria de R. iyengari en condiciones de campo, se seleccionaron 12 criaderos naturales de anofelinos, con áreas que oscilaron entre 50 y 450 m², en los que se observó la presencia de larvas de mosquitos de las especies Anopheles albitarsis Lynch-Arribálzaga y Anopheles rondoni Neiva-Pinto, con densidades de 34 a 66 larvas/m². Para la dispersión del biolarvicida en los 12 criaderos se utilizó una bomba costal manual de fabricación nacional a una presión de dos atmósferas y se aplicó una dosis de 2 000 preparásitos/m². Siete días después de los tratamientos se observó una marcada reducción (85 a 97%) de las poblaciones de anofelinos. Los resultados obtenidos demostraron la posibilidad de utilizar R. iyengari para controlar las poblaciones larvarias de ambas especies de anofelinos.

In September and November 1996 Romanomermis iyengari Welch, a parasite of larval mosquitoes, was released in 44 natural larval habitat sites of Anopheles pseudopunctipennis Theobald in an attempt to reduce the larval populations of this important malaria vector. The selected treatment sites ranged in size from 5 to 500 m². The study was carried out in Pochutla District of Oaxaca State, on the Pacific coast of Mexico. Chemical pesticides to reduce vector populations have been the principal tool in malaria suppression campaigns. However, the excessive use of these chemicals has created pesticide resistance and other serious collateral problems. Therefore, a biological control project using agents that are pathogens of Anopheles larvae was initiated in 1996. The principal objective was to establish mass rearing capacities for R. iyengari. Detailed methodology for rearing and introducing these nematodes into mosquito larval habitats was established at the National Polytechnic Institute of Oaxaca State. Before application of the parasites to larval habitats, site characteristics were determined, including size, depth, aquatic vegetation, salinity, pH, conductivity, temperature, and pretreatment larval density. With a compressed air sprayer, infective mermithid parasites were released at rates of either 2000 or 3000/m², and the parasites produced high levels of infection. Anopheles populations were sampled 72 h posttreatment, and the larvae obtained were taken to the laboratory and examined through microscopic dissection to determine infection levels and mean parasitism. Nematode parasitism ranged from 85 to 100% at all the treatment sites, even though no previous information concerning field parasitism of An. pseudopunctipennis by R. iyengari has been reported. In addition, a significant reduction of mosquito larval density at the treatment sites was found five days after the nematode application. Levels of parasitism were indicative of the number of mosquito larvae killed by the treatment since infected larvae never progressed to the pupal stage. Results from sampling nine of the sites 2 months after the initial application of nematodes indicated that a high number of mosquito larvae were infected by parasites that had emerged from eggs previously deposited in the stratum. This work suggests the potential of this mermithid to reduce An. pseudopunctipennis populations in Oaxaca State.

En septiembre y noviembre de 1996, Romanomermis iyengari Welch, parásito de larvas de mosquitos, fueron liberados en 44 lugares que servían de hábitat natural a larvas de Anopheles pseudopunctipennis Theobald con objeto de reducir las poblaciones larvarias de este importante vector de la malaria. Los lugares elegidos para el tratamiento variaron en tamaño de 5 a 500 m². El estudio se llevó a cabo en el distrito de Pochutla en el Estado de Oaxaca, sobre la costa pacífica de México. Los plaguicidas químicos que reducen las poblaciones del vector han sido el instrumento principal en las campañas para la supresión de la malaria. No obstante, el uso excesivo de estas sustancias químicas ha dado origen a resistencia y a otros problemas serios. Por consiguiente, en 1996 se inició un proyecto de control biológico basado en el uso de agentes que son patógenos para las larvas de Anopheles. El objetivo principal fue establecer un sistema para criar R. iyengari en grandes cantidades. En el Instituto Politécnico Nacional del estado de Oaxaca se estableció un método detallado para criar estos nematodos e introducirlos en los hábitat de las larvas de mosquitos. Antes de colocar los parásitos dentro de los hábitat de las larvas, se determinaron las características de los lugares, entre ellas su tamaño, profundidad, vegetación acuática, salinidad, pH, conductividad, temperatura y densidad larvaria antes del tratamiento. Con un fumigador por compresión de aire se liberaron parásitos de los nematodos infectantes a razones de 2 000 ó 3 000 por m² y los parásitos produjeron tasas de infestación elevadas. A las 72 horas de aplicarse el tratamiento se tomaron muestras de las poblaciones de Anopheles y las larvas así obtenidas se llevaron al laboratorio, donde se sometieron a disección y examen microscópico para determinar los niveles de infestación y la carga parasitaria promedio. La carga de parásitos osciló entre 85 y 100% en todos los lugares donde se aplicó el tratamiento, a pesar de que no se habían notificado datos previamente sobre la carga parasitaria de An. pseudopunctipennis por R. iyengari en campo abierto. En los lugares tratados también se detectó una notable reducción de la densidad de las larvas de mosquitos a los 5 días de aplicarse los nematodos. La carga parasitaria fue indicación del número de larvas de mosquitos que murieron como consecuencia del tratamiento, ya que las larvas infestadas nunca llegaron a formar crisálidas. A juzgar por los resultados del muestreo de nueve de los lugares tratados 2 meses después de la aplicación inicial de nematodos, un gran número de las larvas de mosquitos fueron infectadas por parásitos que habían nacido de huevos que ya estaban depositados en la tierra. Este trabajo sugiere que este nematodo puede reducir las poblaciones de An. pseudopuctipennis en el Estado de Oaxaca.

Mosquito larvae of the species Anopheles pseudopunctipennis Theobals 1901 were studied under laboratory and field conditions to evaluate the level of susceptibility to the parasitism of nematode Romanomermis iyengari Welch 1964. Doses of 5:1 and 10:1 and development stage II larvae collected in natural reservoirs were used for the laboratory assays. A dose of 1 000 preparasitic agents/ m² was applied to field trials. The results of the lab and field tests yielded high levels of infestation in larvae with values ranging from 90 to 100 % and from 85 to 95 %, respectively. A marked reduction of the larval densities was observed in the 5 treated reservoirs seven days later, which showed an elevated susceptibility of the anopheline species to mermethid parasitism.

Se realizó un estudio con larvas de mosquito de la especie Anopheles pseudopunctipennis Theobald 1901, en condiciones de laboratorio y de campo para evaluar los niveles de susceptibilidad al parasitismo del nematodo Romanomermis iyengari Welch 1964. Para los ensayos de laboratorio se utilizaron las dosis de 5:1 y 10:1, y larvas de II estadio de desarrollo, colectadas en reservorios naturales. Para los experimentos de campo se aplicó una dosis de 1 000 preparasíticos/m² de área de superficie. Los resultados hallados tanto en las pruebas de laboratorio como de campo arrojaron elevados niveles de infectación en las larvas, con valores de 90 a 100 % y de 85 a 95 %, respectivamente. Se observó una reducción marcada de las densidades larvarias en los 5 reservorios tratados 7 d después de las aplicaciones, lo que demostró una elevada susceptibilidad en esta especie de anofelino al parasitismo del mermítido.

Para desarrollar el proceso de producción masiva a gran escala del nematodo parásito Romanomermis culicivorax Ross y Smith, 1976, en las condiciones tropicales de Cuba, se tuvo en cuenta la estandarización de un número determinado de variables, tales como: utilización de huevos en el proceso de infectación, dosis, tipos de agua, tipos de sustrato, temperatura, método de siembra de los cultivos y métodos de almacenamiento de los lotes de cultivos. Altos rendimientos en nematodos y aproximadamente igual número de hembras y machos fueron obtenidos cuando se expusieron larvas de mosquitos de la especie Culex quinquefasciatus Say, 1823, a larvas infectivas del parásito.